Actividad mutagénica y genotóxica del material particulado PM25 en Cúcuta, Colombia / Mutagenic and genotoxic activity of particulate matter PM25 from Cucuta, Colombia

Objetivo. Determinar la actividad mutagénica y genotóxica del material particulado PM2.5, captado cerca de una vía de alto flujo vehicular en Cúcuta, Colombia. Materiales y métodos. Entre Enero-Julio de 2011, el PM2.5 fue monitoreado con un equipo Partisol 2025 Plus usando filtros de cuarzo Palmflex. La actividad mutagénica y genotóxica de los extractos del PM2.5 fue determinada usando dos ensayos: el test de Ames y el ensayo cometa. En el ensayo mutagénico se utilizó la cepa TA 100 de Salmonella typhimurium. Para determinar el daño genotóxico se utilizaron linfocitos de sangre periférica. Resultados. Por primera vez en la región fronteriza de Colombia y Venezuela, se reporta la actividad mutagénica y genotóxica asociada con el PM2.5 de Cúcuta. Los resultados muestran actividad mutagénica en la cepa de Salmonella typhimurium TA-100 y genotoxicidad en linfocitos humanos de sangre periférica. Conclusiones. En las muestras del material particulado PM2.5 de la ciudad de Cúcuta se encuentran compuestos que inducen mutaciones, así como compuestos que pueden penetrar hasta la célula e inducir daño en su ADN, lo que puede representar un riesgo en la manifestación de enfermedades tales como el cáncer en la población expuesta.

Objectives. To determine mutagenic and genotoxic activity of particulate matter PM2.5 collected in high vehicular traffic way of Cucuta, Colombia. Materials and methods: Between January to July of 2011, PM2.5 was monitored by a Partisol 2025 sequential air sampler by using Plus Palmflex quartz filters. The mutagenic and genotoxic activity from extract of PM2.5 was determinate by using two assays: the Ames test and comet assay. In the mutagenic assay we used the Salmonella typhimurium strain TA-100. To determine the genotoxic damage peripheral blood lymphocytes were used. Results: This is the first study that has been conducted in border region of Colombia and Venezuela that reports the mutagenic and genotoxic activity associated with particulate matter PM2.5 from Cucuta. The result show mutagenic activity in the Salmonella typhimurium strain TA-100 and genotoxicity in peripheral blood human lymphocytes. Conclusions: Samples of particulate matter PM2.5 from Cucuta city were found, compounds that induced mutation by base substitution were found, also compounds that can reach the cell nucleus and induced genotoxic damage in their ADN were found. This can represent a risk in the population exposed for manifestation for diseases such as cancer.

Plasmin degradation of the alpha chain of fibrinogen/fibrin: improved activation constant and activity determination in assays for tissue plasminogen activator / Degradación por la plasmina de la cadena alfa del fibrinógeno/fibrina: mejoría de la constante de activación y determinación de la actividad en ensayos para el activador del plasminógeno tisular

Objectives. The aim of this investigation was to increase the efficiency of ternary complex formation (fibrin-plasminogen-tissue-plasminogen activator) in the degradation process of the three-dimensional soluble fibrin monomer. Materials and methods. Fibrinogen was purified from human plasma by repeating precipitation six times, using different concentrations of cold ethanol. Fibrinogen was converted to DesAAfibrinogen by degradation with bathroxobin. Human plasminogen was purified by affinity and ion-exchange chromatography, and activated to plasmin by incubation with urokinase. Digested DesAAfibrinogen was prepared by controlled digestion with plasmin. Results. This study demonstrates that the α-chains of DesAAfibrinogen sterically hinder the formation of the ternary complex and are first degraded by plasmin. The degradation of fibrin(ogen) facilitates the in vitro determination of tissue plasminogen activator activity. Finally, release of fibrinopeptide A from bathroxobin-cleaved fibrinogen was confirmed, optimized and evaluated by various methods. Conclusions. Use of digested desAAfibrinogen with plasmin yielded a more stable activation constant of the ternary complex than that of undigested DesAAfibrinogen.

Objetivos. El propósito de la presente investigación fue incrementar la eficacia de la formación del complejo terciario (fibrina-plasminógeno-activador tisular del plasminógeno) en el proceso de degradación de la estructura tridimensional del monómero de fibrina soluble. Materiales y métodos. El fibrinógeno fue purificado de plasma humano, por seis precipitaciones repetidas, con diferentes concentraciones de etanol frío. El fibrinógeno fue convertido a desAAfibrinógeno por degradación con batroxobina. El plasminógeno humano fue purificado por cromatografías de afinidad e intercambio iónico y activado a plasmina con uroquinasa. El desAAfibrinogeno digerido fue preparado por digestión controlada con plasmina. Resultados. Este estudio demuestra que la cadena α del desAAfibrinógeno, dificulta la formación del complejo terciario, por impedimentos estéricos, por lo cual la cadena α se sometió a hidrólisis controlada con plasmina, facilitando así la determinación in vitro de la actividad del activador tisular del plasminógeno. Finalmente, la liberación del fibrinopéptido A por hidrólisis del fibrinógeno con batroxobina, fue confirmada, optimizada y evaluada por varios métodos. Conclusiones. El uso de desAAfibrinogeno digerido con plasmina da una constante de activación más estable en la formación del complejo terciario que el desAAfibrinógeno no digerido (fibrina-plasminogeno- activador tisular del plasminógeno).

Activación y determinación de parámetros cinéticos de la plasmina humana y Ovis aries / Activation and comparative kinetics of Ovis aries plasmin with human plasmin

Objetivo. Comparar las cinéticas y activaciones, unificar las purificaciones y determinar las secuencias de los terminales-N de los plasminógenos Ovis aries y humano. Materiales y métodos. Los plasminógenos fueron purificados por el mismo método: cromatografías de afinidad e intercambio iónico, activados con urocinasa, la secuencia de los terminales-N se realizó por el método de Edman Resultados. La afinidad de la plasmina Ovis aries por el sustrato cromogénico fue de 0.45 mM, 11.8 veces mayor que la afinidad de la plasmina humana (5.3 mM). Conclusiones. Se confirma y unifica el método de purificación de los plasminógenos del plasma, para todos los mamíferos. La alta afinidad de la plasmina Ovis aries confirma una mayor afinidad de las plasminas animales por el sustrato cromogénico, en comparación con la plasmina humana.